產(chǎn)品說(shuō)明

• 帽子結(jié)構(gòu)是指在真核生物中轉(zhuǎn)錄后修飾形成的成熟mRNA在5'端的一個(gè)特殊結(jié)構(gòu)，是在RNA三磷酸酶，mRNA鳥苷酰轉(zhuǎn)移酶，mRNA甲基轉(zhuǎn)移酶催化下形成。該結(jié)構(gòu)對(duì) mRNA 的穩(wěn)定性、轉(zhuǎn)運(yùn)及翻譯過(guò)程均有重要作用，是mRNA在體內(nèi)發(fā)揮生物學(xué)功能必不可少的元件。
• 本品是一種經(jīng)過(guò)基因工程改造的重組mRNA加帽酶，分子量約99KDa，同時(shí)具備RNA 三磷酸酯酶、鳥苷酰基轉(zhuǎn)移酶和鳥嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶三種酶活性，在合適濃度的加帽緩沖液（Capping buffer），鳥苷三磷酸（GTP），S－腺苷甲硫氨酸（SAM）等條件下，可在一個(gè)小時(shí)之內(nèi)完成 mRNA 加帽，在mRNA 的 5'末端形成Cap0 帽子結(jié)構(gòu)，如與二氧甲基轉(zhuǎn)移酶共同使用，可進(jìn)一步形成Cap1 帽子結(jié)構(gòu)。
• 本品按照 GMP要求生產(chǎn)，產(chǎn)品以無(wú)菌液體形式提供，可應(yīng)用于mRNA 的加帽反應(yīng)或 mRNA 的5'末端標(biāo)記反應(yīng)。

產(chǎn)品包裝

活性定義

在37℃、pH8.0的條件下，30分鐘內(nèi)將75 pmol的20nt RNA轉(zhuǎn)化為Cap-0 RNA所需的酶量定義為1個(gè)活性單位。

保存體系

保存溫度：-20℃，或-80℃長(zhǎng)期保存。

注意事項(xiàng) 

1. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作；實(shí)驗(yàn)操作需要注意全程保持無(wú)RNA酶環(huán)境，防止RNA降解。 
2. 所提取的 RNA 需經(jīng)過(guò)純化并使用無(wú)核酸酶水溶解； 
3. 在加帽反應(yīng)前需進(jìn)行 RNA變性 以去除 5'末端的二級(jí)結(jié)構(gòu)； 
4. 對(duì)于已知 5'末端結(jié)構(gòu)的 RNA，可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間至 60 分鐘，以提高加帽率； 
5. 為增強(qiáng)RNA的穩(wěn)定性，可在反應(yīng)體系中額外添加RNA酶抑制劑（終濃度為1U/μl）。
6. SAM在pH7~8、37℃環(huán)境下穩(wěn)定性較差，加入反應(yīng)體系前需要保持在冰上。

參考反應(yīng)體系（20μl）

37℃反應(yīng)30分鐘